Ник-трансляция смещение разрыва

Ник-трансляция, смещение разрыва * нік-трансляцыя, зрушэнне разрыву * nick translation — замена нуклеотидов в двунитчатой ДНК радиоактивно меченными нуклеотидами in vitro с использованием ник-активности ДНКазы I и полимеразной активности ДНК-полимеразы I (из E. coli). Циклы удаления и полимеризации смещают разрыв вдоль молекулы ДНК, при этом среди замещенных нуклеотидов появляется все больше меченных. Для этого ники создаются в немеченой (холодной) молекуле ДНК путем частичного вырезания нуклеотидов при помощи ДНКазы I с образованием 31-OH-концов. Добавляется ДНК-полимераза I, которая начинает реакцию репликации с 31-OH-конца каждого разрыва и одновременно удаляет нуклеотиды с 51-стороны (благодаря способности ДНК-полимеразы I проявлять еще 51-31экзонуклеазную активность). Т. е. образуются новые ники. Если в реакционную среду добавить один к.-л. меченый нуклеотид (напр., 32Р-дезокси-нуклеотидтрифосфат), то в процессе полимеразной реакции произойдет замещение исходных нуклеотидов в двунитчатой ДНК на радиоактивно меченные. Метод Ник-т. широко используется для создания меченых зондов в экспериментах по гибридизации. Однонитчатые ДНК и РНК также могут задерживаться Н. ф., если его проинкубировать при 80 °С в течение 2 ч (спекание). Такие блоты (фильтры) используются в нозерн- и Саузерн-блот экспериментах.